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CRISPR那些事儿
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FAQ
什么是基因干扰？它如何工作？
基因干扰（Gene Knockdown）是顺利获得小RNA分子（如siRNA、shRNA）或CRISPRi系统部分抑制目标基因表达的技术：
siRNA/shRNA：siRNA与细胞内的RISC复合体结合，降解靶标mRNA，阻断蛋白翻译。
CRISPRi：改造的dCas9蛋白结合gRNA后阻断基因启动子，抑制转录（不切割DNA）。
适用场景：基因功能研究、疾病机制解析、药物靶点验证。
我们主要给予哪些类型的基因干扰技术服务？（例如：siRNA转染、shRNA慢病毒/腺病毒、CRISPRi）
| 技术类型 | 适用场景 | 交付形式 |
|---|---|---|
| siRNA转染 | 快速验证（72-96小时效果） | 快速验证（干扰后细胞/实验报告） |
| shRNA病毒载体 | 长期抑制（稳定株筛选） | 病毒颗粒/稳转株细胞 |
| CRISPRi | 高特异性、抑制（i）基因 | dCas9细胞系+gRNA载体 |
siRNA、shRNA和CRISPR干扰（CRISPRi）有什么区别？我该如何选择？
| 参数 | siRNA | shRNA（病毒载体） | CRISPRi |
|---|---|---|---|
| 作用周期 | 瞬时（5-7天） | 长期（可稳定传代） | 长期稳定 |
| 细胞适用性 | 易转染细胞 | 广谱（包括难转染细胞） | 需要构建dCas9细胞系 |
| 脱靶风险 | 中-高 | 中 | 极低 |
| 用途 | 快速验证 | 动物/细胞模型 | 高精度调控 |
为什么选择EVO视讯 EVO真人生命基因点突变服务？
EVO视讯 EVO真人生命基因全新升级第七代Bingo™ Prime Editing (PE7），优化编辑蛋白和RNA编辑活性。对比第五代PE技术，点突变成功率和基因编辑效率显著提升，全球知名院校博士专家团队一对一服务。
稳转株与瞬转株有何区别？
稳转株和瞬转株的主要区别在于基因表达的持续时间和稳定性：
瞬转株—目标基因在细胞内短暂表达，通常持续数小时到数天，适用于短期实验。
稳转株—目标基因稳定整合到细胞基因组中，能够长期表达，适用于长期研究和生产。
诱导多能干细胞（iPSC）是什么？
诱导多能干细胞（iPSC）是一类顺利获得将成体细胞重新编程为多能状态的细胞。它们具有类似于胚胎干细胞的特性，能够分化为体内的几乎所有细胞类型。这种技术允许科学家在体外生成各种细胞类型用于研究和治疗，而不需要使用胚胎干细胞。
如何选择合适的细胞进行文库筛选？
细胞选择可以遵循以下原则：
1）与研究目的相符
2）sgRNA文库靶向的基因要与细胞的属源相符
3）细胞可以稳定传代
4）转染效率高
尽量不选用原代细胞。由于原代细胞无法稳定传代，可能在文库筛选实验的过程中，原代细胞已经出现大量死亡，无法完成实验。如果选用原代细胞进行文库筛选，为分析决上述的风险，可以顺利获得降低细胞覆盖度和选择gRNA数较小的文库进行筛选，尽可能降低文库细胞池的数量和缩短实验周期。
1）与研究目的相符
2）sgRNA文库靶向的基因要与细胞的属源相符
3）细胞可以稳定传代
4）转染效率高
尽量不选用原代细胞。由于原代细胞无法稳定传代，可能在文库筛选实验的过程中，原代细胞已经出现大量死亡，无法完成实验。如果选用原代细胞进行文库筛选，为分析决上述的风险，可以顺利获得降低细胞覆盖度和选择gRNA数较小的文库进行筛选，尽可能降低文库细胞池的数量和缩短实验周期。
什么是报告细胞系？
报告细胞系是顺利获得稳定表达报告基因，用于指示特定基因转录活性或信号通路状态的功能性细胞模型。
是否支持定制化报告细胞系？
可根据研究目标定制特定信号通路、启动子或报告基因组合的报告细胞系。
报告细胞系主要用于哪些研究？
主要应用于信号转导机制研究、基因调控分析、受体-配体相互作用研究以及药物筛选与功能验证。
常用的报告系统有哪些？
常见报告系统包括荧光素酶（Luciferase）和荧光蛋白（如 GFP、RFP），可根据实验需求选择不同检测方式。
报告信号是否稳定且具有可重复性？
经验证的稳定报告细胞系在多代传代中可保持一致的信号响应，适用于定量和比较分析。
是否适用于体内实验？
支持生物发光成像
Reporter系统比瞬转有什么优势？
- 稳定表达
- 数据一致性高
- 适合长期实验
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